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耗材怎么收費(fèi)？
耗材主要是試劑盒，一個(gè)試劑盒包含10張芯片和對(duì)應(yīng)所需的緩沖液、裂解/電泳液等試劑具體售價(jià)請聯(lián)系銷售人員。
設(shè)備使用有特殊要求嗎，比如實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，特殊操作等？
使用時(shí)實(shí)驗(yàn)室溫度確保在 5-35 C°之間，相對(duì)空氣濕度≤80%之間。如果溫度、濕度未達(dá)到要求，要打開空調(diào)、除濕機(jī)或其他相關(guān)設(shè)備，直到達(dá)到要求再開始實(shí)驗(yàn)。 操作過程中使用一次性乳膠手套，注意防塵操作，在實(shí)驗(yàn)過程中所有的關(guān)于芯片的操作一定要注意不要?jiǎng)幉涞侥z面。移動(dòng)芯片時(shí)使用拇指與食指捏住芯片長邊兩端或者使用鑷子夾住芯片一端，保持膠面朝上防止芯片污染破損。 相較于傳統(tǒng)western blot，本技術(shù)無需轉(zhuǎn)膜，故而實(shí)驗(yàn)操作更方便也更容易操控，您收到設(shè)備后，我們會(huì)安排技術(shù)工程師到現(xiàn)場安裝調(diào)試，提供1-2天的操作使用培訓(xùn)，您不用擔(dān)心。
實(shí)驗(yàn)還需要用到哪些設(shè)備呢？貴公司有售賣嗎?價(jià)格多少？
整體實(shí)驗(yàn)還會(huì)用到光學(xué)顯微鏡、水平搖床、水浴鍋、迷你玻片離心機(jī)、芯片掃描儀/共聚焦顯微鏡等，多數(shù)為實(shí)驗(yàn)室/平臺(tái)常備儀器，其他精密儀器，以及客戶專項(xiàng)實(shí)驗(yàn)希望搭配的設(shè)備我們也有售賣，采購了MONO-X1的用戶，采購配套儀器可適當(dāng)優(yōu)惠；具體銷售資料與報(bào)價(jià)請與對(duì)接您的銷售人員聯(lián)系。
購買后短期內(nèi)不熟悉設(shè)備使用，有相關(guān)完善措施嗎？
①在安裝機(jī)器的時(shí)候，我們會(huì)有技術(shù)人員提供1-2天的操作使用培訓(xùn)，也會(huì)給接受培訓(xùn)的人員留下操作手冊、各類操作視頻； ② 在后續(xù)的使用過程中，我們會(huì)在用戶遇到疑難操作問題時(shí)提供技術(shù)咨詢服務(wù)。
將單細(xì)胞懸液滴落到芯片上進(jìn)行單細(xì)胞捕獲，如何確定落到微孔里的是單細(xì)胞？
目前常備芯片孔徑有30um和60um兩種，能夠捕獲絕大部分的目的細(xì)胞，只需要根據(jù)目的細(xì)胞的大小選擇合適的芯片。單細(xì)胞捕獲過程可以在明場光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行操作，通過顯微鏡觀察細(xì)胞的落孔情況。 我們先將芯片放置于顯微鏡下，然后將單細(xì)胞懸液均勻地滴落到芯片上，細(xì)胞依靠重力掉落到微孔內(nèi)，落孔率符合泊松分布，正常情況下單細(xì)胞落孔率在80%以上，個(gè)別孔為2-3個(gè)細(xì)胞。這個(gè)過程中可以根據(jù)樣品細(xì)胞的狀態(tài)，通過延長落孔時(shí)間或者調(diào)整懸液濃度，進(jìn)一步提高單細(xì)胞的落孔率。細(xì)胞落孔完成后，清洗掉表面的殘余懸液，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。由于落入多個(gè)細(xì)胞的孔徑得到的蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)有明顯差異且數(shù)量有限，可以通過智能軟件的處理舍去，就得到了單細(xì)胞靶蛋白的表達(dá)數(shù)據(jù)。
如何選擇適合的芯片規(guī)格？例如30um孔徑的芯片適用于多大直徑的細(xì)胞？
芯片孔徑大小為細(xì)胞大小的1.5-3 倍為最佳。即最適用于30um芯片的是10-20um的細(xì)胞，最適用于60um芯片的是20-40um的細(xì)胞。 影響單細(xì)胞落孔率的因素除了芯片孔徑，還有單細(xì)胞懸液的密度。我們常使用的單細(xì)胞懸液濃度為10?/ml，可根據(jù)樣品狀態(tài)進(jìn)行調(diào)整，特殊情況下還可以采用顯微上樣的方式。故10um以下的細(xì)胞依舊適用于30um的芯片，但需要適當(dāng)調(diào)高懸液的密度，例如調(diào)整成10?/ml，同理40um以上的細(xì)胞可選用60um的芯片。
單細(xì)胞western凝膠電泳得到的條帶與傳統(tǒng)western 得到的條帶有什么不同？
（直接發(fā)實(shí)圖）單細(xì)胞western得到的條帶類似彗星，具體圖片可以參考發(fā)表在Cell上的文章《Rapid Generation of Somatic Mouse Mosaics with Locus-Specifific, Stably Integrated Transgenic Elements》，上面有清晰的結(jié)果展示圖。
一張芯片單次可檢測2-10個(gè)靶蛋白，是一次性孵育10個(gè)抗體，還是需要洗脫重孵育呢？
單次檢測10個(gè)靶蛋白是通過洗脫重孵育的方式實(shí)現(xiàn)的。目前國際上做到的極限是12個(gè)，因?yàn)閯冸x抗體對(duì)抗原有不可逆的損失，測試的結(jié)果表明，經(jīng)過4次剝離，即使豐度再高的蛋白也檢測不到了。故若一次用3種不同的激發(fā)光檢測3種蛋白，經(jīng)過4次洗脫重孵育，3×4=12，即可檢測12個(gè)蛋白。 建議在做單細(xì)胞蛋白檢測之前，先用傳統(tǒng)方法確定目標(biāo)蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)豐度情況，按照豐度從低到高進(jìn)行檢測。目前發(fā)表的文章一般是檢測1-3個(gè)蛋白，為了得到更利于發(fā)表的數(shù)據(jù)，我們建議單次檢測 1-3個(gè)蛋白，洗脫重孵育檢測4-6個(gè)蛋白。
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