可以同時(shí)檢測(cè)幾種蛋白，如何選擇抗體？
可以同時(shí)檢測(cè)多少蛋白除了考量抗體特異性外，也取決于檢測(cè)設(shè)備的通道數(shù)量，例如我們最常用的芯片掃描儀有三個(gè)檢測(cè)通道，我們一般就最多同時(shí)檢測(cè)3種蛋白。
為了減少二抗孵育時(shí)的交叉吸附，做多重?zé)晒舛繖z測(cè)時(shí)，建議選擇種屬差異比較大的一抗。例如同時(shí)檢測(cè)三種蛋白，可以選擇小鼠、山羊、兔這類種屬差異比較大的一抗，再孵育對(duì)應(yīng)熒光標(biāo)簽的二抗。一抗孵育完成后，多次反復(fù)清洗芯片再上二抗，就能夠通過采集熒光信號(hào)進(jìn)行目標(biāo)蛋白的分析，包括條帶上的位置信息，熒光強(qiáng)度信息等。
因?yàn)閣estern可以通過熒光強(qiáng)度表現(xiàn)蛋白的分子量和豐度信息，無論是單細(xì)胞蛋白還是微量樣本，都可以進(jìn)行熒光定量western分析。